摘要

CAR-T作为有可能治愈癌症的肿瘤免疫治疗方法，目前面临着一些诸如针对实体瘤的疗效有限、治疗白血病和淋巴瘤的复发率很高等问题。在改进T细胞对实体瘤杀伤效果的研发过程中，科学家们开发出了一种新型基因编辑T细胞(BiTE-T)。BiTE-T分泌的双向特异性抗体BiTE，可作为一个桥梁，分别靶向T细胞和肿瘤细胞的表面抗原，辅助前者识别并杀伤后者。

在本研究的体外实验中，我们构建了806BiTE-T细胞(分泌的BiTE能同时靶向肿瘤细胞的EGFR和T细胞的CD3)。随后借助Axion BioSystems的Maestro Z平台检测到806BiTE-T相较于CAR-T对胶质母细胞瘤具有更强杀伤效力，同时对星形胶质细胞的毒性却更低。在此基础上，我们继续开展其他体外和基于胶质瘤小鼠模型的体内实验，发现将两种T细胞混合加到靶细胞培养体系中会展现出比单独使用CAR-T或BiTE-T更高的抗肿瘤活性。

总之，BiTE-T在体外和体内均表现出一定的抗肿瘤活性、敏感性和特异性，而将806BiTE-T和CAR-T配合使用效果更加优异。这一结果提示我们可以通过BiTE来增强CAR-T对实体瘤的疗效。

这些研究成果来自于宾州大学的Donald M. O’Rourke团队及哈尔滨医科大学第一附属医院的团队，并被发表在了Molecular Therapy (IF 12.9)上。

阻抗实验

 

 

Figure S5A 使用Maestro Z阻抗平台比较CAR/BiTE T细胞对人源星形胶质细胞的毒性，H, L代表CAR或BiTE的表达水平的高或低，UTD为未加入T细胞的阴性对照组。

研究者使用转基因技术，分别构建了能够高、低表达CAR或BiTE的效应T细胞，随后用Maestro Z平台检测了这两种T细胞(共四组)对人源星形胶质细胞的毒性（Figure S5A-左）。结果显示除806CAR_H外，其余各组对靶细胞的活力几乎没有影响。806CAR_H 处理组的阻抗值在第24h低于对照组约31% (即Cytolysis=31%，p < 0.0001，Figure S5A-右)，显示出其对人源星形胶质细胞有一定的延时毒性作用。

编者按：根据阻抗数据，806CAR_H对于星形胶质细胞的毒性作用约在共培养15h后开始产生。而传统的终点法实验可能会错过这些关键时间点。

Figure S5B,C 使用Maestro Z阻抗平台比较CAR/BiTE T细胞对5077及5077vIII细胞的杀伤效力，H, L代表CAR或BiTE的表达水平的高或低，UTD为未加入T细胞的阴性对照组。

此外，我们还比较了两种T细胞(共四组)对两种胶质母细胞瘤(5077与5077EGFRvlll均来源于胶质母细胞瘤干细胞系，两者分别表达EGFR与EFGRvlll抗原)的杀伤效力。在效应细胞与靶细胞共培养24h后，我们通过AxIS Z软件直接计算得到的细胞杀伤百分比结果发现，806BiTE-T高低表达组对靶细胞的杀伤能力均强于对应的806CAR-T组，这说明BiTE的表达有提升效应细胞抗肿瘤活性的作用(Figure S5B, C)。

阻抗实验方法

1. 实验步骤

• 使用0.05% poly-D-lysine hydrobromide对96孔 CytoView-Z(Axion BioSystems)阻抗板进行包被，然后加入20 ug/mL的Laminin，并在37℃环境下过夜。
• 包被完成后，使用diH2O清洗阻抗板三次，并在每孔中加入100ul培养基。
• 将肿瘤细胞及人源星形胶质细胞以5x10^4/每孔及3x10^4/每孔的密度接种到阻抗板上。将每孔培养基终体积控制为200 uL。
• 在室温下静置1 h，以确保细胞沉降并附着在阻抗板底部的微电极上。然后将阻抗板放入Maestro Z中进行数据采集。

2. 数据采集及处理

• 每1分钟采集一次数据，记录24h，连续监测细胞的状态。

• 在24 小时将细胞板取出，每孔吸弃100ul培养基。随后，对照组加入100ul新鲜培养基。处理组加入效应细胞（效靶比1:1）。

• 所有数据都以media only作为对照进行校正以消除培养基对阻抗的影响，然后以添加效应细胞时的阻抗进行标准化处理。

• 使用 AxIS Z 软件(Axion BioSystems)一键快速生成靶细胞的毒性或杀伤百分比数据。

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