研 究 概 述

    

 
众所周知,以模型动物或2D细胞为载体进行神经疾病的研究虽然能够模拟疾病的一些生理和病理学特征,但与人类大脑仍存在较多显著差异。因此,对神经相关疾病的机制研究和临床前药物筛选迫切需要在体外建立高阶的3D脑组织模型。为了解决这个问题,武汉大学陈璞老师团队基于反向工程和仿生设计,采用声学组装技术以无标记和无接触的方式分别制备了hiPSC衍生的神经干细胞和神经元。并继续进行培养,以构建高仿真人脑皮层微组织模型(即Microtissues,由相互作用的神经元、胶质细胞和内皮细胞混合组成,旨在模拟体内神经组织结构)。
 
作者得到的组织模型检测结果令人振奋。它们具备与人类皮层神经元相似的显微解剖特征,并包含六层400um宽度的神经元结构。借助Axion BioSystems公司的Maestro MEA设备,作者还证实了这些层间具备突触连接和神经网络功能。最后,作者利用HSV-1病毒感染组织并使其出现Aβ累积和神经元死亡的现象,探讨了建立体外AD的3D模型的可行性。上述成果于2023年5月发表在Advanced Materials (IF 29.4) 上。
 
 

 

 

研究内容

 

 
 

在本研究中,作者开发了基于反向工程和仿生设计构建皮层微组织模型的策略。首先,采用声学技术将hiPSC衍生的神经干细胞和神经元分别组装成六层同心细胞结构,并继续在3D水凝胶中分化它们以获得皮层微组织(图1A)。

 

图1.反向生物工程构建人类来源的皮层微组织模型的策略示意图

 

作者采用了如下两种组装皮层微组织策略:一用声学生物技术组装神经干细胞,并在三维水凝胶体系中进行持续的分化和培养;二是利用声学生物组装技术直接组装成熟神经元形成3D结构并持续培养。这两种策略都能够成功得到皮层微组织。

 

随后,作者使用Axion BioSystems公司的Maestro MEA平台对基于策略一得到的皮层微组织进行了神经电生理功能检测和分析(图3H, I)通过分析神经元发放(Spike)相关参数来反映样本的兴奋水平及由突触连接形成的神经网络活动。培养至35天皮层微组织具有自发的电活动,并且声学组装组的平均发放率、发放次数和簇放电次数均显著高于对照组(图3H,小编按:对照组除未进行声学组装外,其它处理与组装组相同)。这些结果表明,通过策略一制备的皮层微组织的可促进其神经成熟并改善神经网络发育水平。

 
 
 

图3.策略一hNSC声学组装及对照组皮层微组织的神经信号

H) hNSC组装组和对照组中的平均发放率、发放次数和簇放电次数,I)两组原始信号波形图。* 表示右上角Spike信号的来源。

 

作者还记录了基于策略二开发的皮层微组织的神经电活动(图4D),其发放幅度几乎是对照组的3倍(图4F),簇放电次数也显著高于对照组(图4E)。再次验证了通过声学将神经元组装成皮层微组织能够显著促进神经网络功能。

 

图4.策略二神经元声学组装及对照组皮层微组织的神经信号

D)皮层微组织在MEA板明场下的图像(小编按:Axion MEA板底透明,可以很方便地观察3D样本与电极的相对位置)E)神经元组装组和对照组的平均发放率、发放次数和簇放电次数。F)两组原始信号波形图* 表示右上角Spike信号的来源。

 

 

小结

 

 

总体而言,作者成功建立了人皮层微组织体外模型。这一模型对于探索神经退行性疾病的机制和筛选神经保护剂方向具有重要的意义。
 

 

 

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END

 

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