细胞转染与转导

  应用案例  

全自动转染效率分析：

>> 监测并量化转染后细胞对外源基因的接纳和表达

>> 测试不同的实验条件来优化转染方案

>> 评估细胞在转染前后的活力和密度

监测并量化转染后细胞对外源基因的接纳和表达

转染作为一种实验工具可以更多地揭示基因调控和蛋白功能的秘密，所以被广泛地用于细胞生理及疾病复杂分子机制的研究中。Axion活细胞成像系统的先进成像能力和机器学习算法将赋予您对细胞内含荧光报告基因载体的表达进行直接观测和定量的能力。

以上为使用Lux3 FL所拍摄的细胞转导延时影像。

该实验的样本为HepG2细胞，使用了BacMam表达系统进行转导。通过图像数据自动分析，软件给出了细胞覆盖度和荧光标记计数的实时结果（显示在上方的两个图表中）。蓝色对应整体样本，绿色和红色对应其中表达了BacMam-Actin-GFP及/或BacMam-Nucleus-RFP的那部分细胞。您可以看到从转染后第7小时开始，红色和绿色荧光蛋白的表达一直呈现迅速升高的趋势，且过夜以后仍然未见衰退，虽然此时细胞的增殖已经进入平台期。而且转导表达会先发生在细胞骨架中，那里表达的蛋白量也高于细胞核。这些数据结合影像，为您提供了综合性的转导质控依据。

测试不同的实验条件来优化转染方案

在确定转染方案时，转染条件的优化永远是关键的一步。您可以通过优化诸如接种密度、核酸数量和转染时间等变量以提高转染效率。Axion活细胞成像系统适用于转染方案中多个步骤的优化工作。在如下的实验中，我们使用了Omni FL多孔板活细胞工作站开展了不同参数影响转染效果的比较。

我们尝试了6种BacMan载体浓度及三种接种密度的条件组合，每个单一组合条件进行了3重复。样本为HeLa细胞，载体会在细胞核内表达GFP。由于具备箱内长期观察的能力，Omni FL可以给出单一组合条件下，样本中表达GFP细胞占比的时间变化曲线，为您作组间比对找到最适合的转染方案提供直观的数据支持。这里列举了40PPC和60PPC载体浓度下三种不同接种密度的HeLa细胞表达Nucleus-GFP的实时变化曲线。

  参考资料