划痕和细胞迁移实验

  应用案例  

使用活细胞成像技术分析‘伤口的愈合’

利用Omni多孔板活细胞工作站，您可以掌握不同样本中的细胞在迁移方式上的区别，也能对多种处理（如加药）条件影响其迁移能力的效果做比较。

在这里，我们对接种于48孔培养板内的C6大鼠神经胶质瘤细胞，开展了伤口（用移液器吸头划出）愈合实验以评估其迁移能力。得益于Omni的全景扫描成像功能以及强大的图像分析算法，您能获得涵盖多个样本孔的概览图（图 1A）以快速目测判断实验进程和孔间差别（请注意，没有细胞生长的区域已经被自动识别并用蓝色标识出来）。除此之外，软件还提供了‘凝视‘功能，供您对多个选中的孔或者划痕区域开展跨时间点的延时成像。比如，我们在第0、8和17小时分别对右下角的孔中选中的那块区域（黄色框内）成像，并在图 1A右侧纵向排列展示并加以比较。这样，划痕两侧细胞迁移的能力就一目了然了。以上述的方法，伤口闭合的全程就能被Omni以可视化的方式记录下来。基于这些存储于云端的高质量数据，软件还能自动计算出伤口面积及细胞迁移速度随时间变化的线图（如图 1B和图 1C，对应于图1A中的四个样本），助您高通量地快速做出定量的分析。

图 2 | 这里呈现的是对应于上述实验中某一个样本的延时影像。我们以每小时拍摄一幅明场全孔照片的频率，进行了全长为23小时的采样，最后拼接成这段动画。它能帮助您直观地了解伤口愈合的总体趋势，以便您找到感兴趣的时间点对某片细胞亚群做进一步的研究。

Omni：高通量才能实现样本间的有效比较！

我们再举一个多样本平行比较的案例，来展现一下Omni的高通量优势。 首先，将NIH-3T3小鼠成纤维细胞接种到96孔板中，并使用梯度浓度（紫色箭头所示）的blebbistatin（肌球蛋白II抑制剂）和cytochalasin D（肌动蛋白聚合抑制剂）两种药物进行组合给药处理。在随后的体外划痕实验中，我们对每个样本中的划痕周边区域以1小时间隔采集图像，总时长为48小时，获得的数据经软件自动拼接生成如下涵盖16个样本的延时影像，画面的单位比例尺为1000 µm。通过目测分析孔间愈合速度的差异，我们能很快得出一些定性的结论。比如，在更高的浓度下，两种药物都能单独抑制NIH-3T3的迁移，而且联合用药的协同效应很明显。还有，较低浓度下的联合用药与单个药物在更高浓度下的药效类似。这些观察为后续的药物机理或者模式动物药效研究提供了重要的提示。

 参考资料